NK細胞療法未來的方向
自然殺傷細胞（Natural killer cell，NK細胞 )，是一類先天淋巴細胞，具有識別和消除病毒感染細胞及腫瘤細胞的能力。隨著CAR-T細胞療法取得了顛覆性成功，大家對對NK細胞在抗腫瘤免疫療法中的潛力也興趣倍增。在臨床上，第一代NK細胞療法取得了可喜的效果，顯示出令人鼓舞的療效和良好的安全性。國際頂級期刊Nature Reviews Cancer (IF=69.800)雜誌上的一篇綜述，作者介紹如何增加NK細胞毒性和壽命的各種方法，迎接挑戰和抓住機遇，並從臨床開發經驗教訓中指導下一代NK細胞產品的設計。
NK細胞來源和供體選擇
NK細胞發現於20世紀70年代，主要與殺死感染的微生物和惡性轉化的同種異體和自體細胞有關。在人體內，NK細胞來源於CD34+共淋巴祖細胞。據估計，NK細胞的半衰期大約為7~10天，它們通過與DC細胞的相互作用發揮關鍵的免疫調節功能。
NK細胞的來源廣泛，包括外周血、臍帶血、多能幹細胞（ESC和 iPSC）和NK細胞系（如NK92細胞系等） 。所有來源都可以提供具有臨床意義的細胞劑量，適合製備CAR-NK，並已過渡到人體研究。每個來源都有優點和潛在的挑戰。CAR-NK細胞已成功從包括臍帶血在內的不同平臺進行工程設計。
▉ 外周血或臍帶血來源
原代NK細胞可以從外周血（PB-NK細胞）中收穫或來自臍帶血（CB-NK細胞）。PB-NK細胞，是2005年由Dario Campana領導的首次成功將CAR構建體遞送到NK細胞中的平臺。PB-NK細胞為目前正在臨床試驗的各種產品提供了基礎材料。
▉ 誘導多能幹細胞來源
iPSC是NK細胞的一個的來源，iPSCs可高效擴增，還能體外分化。通過iPSC可以製造大量遺傳背景一致的NK細胞產品。iPSC的製備需要種子細胞少，可大量培養，成本較低，可實現自體供給，免疫原性較低。iPSC來源的NK細胞有兩個缺點，第一，表達低水準的CD16。第二，iPSC可能含有“表觀遺傳記憶”，而這可能會影響與供體細胞不同的特定細胞譜系的發育。
▉ NK細胞系來源
NK-92是第一個獲得美國FDA批准進行臨床試驗的NK細胞，是一種均勻的、永生的NK淋巴瘤細胞系，可以離體擴增。NK-92細胞缺乏大多數KIRs的表達，因此不太可能被抑制。然而，在患者給藥之前需要照射NK-92衍生的細胞產物，這影響體內的長期持久性和整體性治療潛力。另一個缺點是，由於缺乏CD16表達，NK-92細胞缺乏通過ADCC介導細胞殺傷的能力。
如何增強NK細胞功能
▉ 嵌合抗原受體
CARs是合成的融合蛋白，包括細胞外抗原識別域和觸發細胞活化的細胞內信號傳導部分。CARs可以在免疫效應細胞上表達，以重新程式設計其對特定靶點的特異性。CAR-T細胞療法是第一個出現的。此後，傳統上為T細胞設計的CAR已被用於CAR-NK細胞的產生，研究表明這些細胞可以靶向特異性腫瘤，同時保持理想的安全性。細胞內抗原以肽-HLA複合物的形式存在，通過TCR檢測。工程NK細胞表達TCR可以檢測這種肽。TCR-NK細胞，被證明可以引發抗腫瘤反應。
▉ NK細胞銜接器
NK細胞銜接器，可以將NK細引導到腫瘤部位，通過觸發NK細胞上的啟動受體來引發強烈的抗腫瘤反應，同時結合腫瘤細胞上的目標抗原。開發策略包括三個特異性或四個特異性設計，靶向腫瘤上的多種抗原，或通過交聯細胞因數部分，促進NK擴增和存活，旨在增強抗腫瘤作用。細胞銜接器的使用，因此代表了一種更簡單，成本更低的製造工藝，來提供能夠誘導CAR樣活性的產品。
▉ 細胞因數
細胞因數，可以增強NK細胞毒性，並促進NK細胞增殖。連續的離體刺激，會使NK細胞“細胞因數上癮”，並在沒有體內細胞因數支援的情況下輸注這些細胞時會降低持久性。通過基因工程，NK細胞被修飾以產生細胞因數，維持細胞效力，增殖和持久性。這種自分泌維持引起了人們的極大興趣，CAR-NK細胞正在出現。
▉ 克服免疫抑制
腫瘤通常表現出異常的代謝行為，導致腫瘤生存環境中乳酸水準升高以及有毒分解代謝物，腺苷和活性氧的濃度增加。此外，腫瘤微環境（TME）內，存在不斷增殖且功能失調的脈管系統和免疫抑制細胞亞群，導致進入TME的各種免疫效應細胞發揮不出作用。
為了克服免疫抑制，目前的策略集中在兩個方面：
- 改變腫瘤的代謝構成或修改免疫細胞中的基因表達程式，以保護它們免受TME中抑制性代謝物的侵害；
- 通過小分子抑制劑或拮抗抗體阻斷腫瘤細胞上的CD73克服腺苷介導的免疫抑制。
臨床前研究中，通過基因編輯刪除CAR-T細胞和CAR-NK細胞中的腺苷A2A受體，顯示出抗腫瘤的功效。
▉ 阻斷免疫檢查點
腫瘤可逃避免疫監視（比如免疫檢查點的參與），使用相應單抗可逆轉NK功能障礙。然而，通過單抗來調節患者的免疫細胞，但需要多次輸注。隨著基因編輯技術的進步，NK細胞可以被穩定修飾，從而增強NK細胞功能。此外，在確定CISH（細胞因數誘導的含SH2蛋白）作為NK細胞功能的關鍵負調節蛋白後，設計了缺乏這種細胞內細胞因數檢查點的CAR-NK細胞，其代謝適應性和抗腫瘤活性明顯提升。
▉ 加強NK細胞向腫瘤的運輸
NK細胞進入和穿透腫瘤的能力，是有效抗腫瘤免疫的關鍵。NK細胞與其他免疫細胞類似，通過趨化因數受體及其在TME中分泌的同源配體的動態相互作用被引導到腫瘤部位。由於內化和降解導致趨化因數表達的迅速喪失，因此，採用基因工程來為NK細胞配備穩定的異位趨化因數受體，是未來CAR-NK發展的一個方向。
臨床經驗教訓
CAR-T細胞治療，讓一些患者實現了長達十年的有效治療。NK 細胞具有獨特的抗腫瘤效應，不受MHC限制的細胞毒性、產生細胞因數和免疫記憶等功能，使其成為先天性和適應性免疫反應系統中的關鍵角色。早期臨床資料表明：NK細胞非常適合用於異體治療環境。雖然安全性結果令人鼓舞，但還需要進一步研究以闡明同種異體NK細胞是否能夠逃避T細胞的排斥反應以獲得長期持久性。臨床研究表明，NK細胞在治療血液系統惡性腫瘤方面具有安全性和有效性。重要的是，無論採用哪種方法，NK細胞療法都一直顯示出良好的安全性。迄今為止，沒有觀察到CRS或GVHD。然而，大多數報導的成功僅限於血液系統惡性腫瘤，並非所有患者都對NK細胞治療有反應，有些患者最終會復發。
無論如何，CAR-NK 細胞療法是一個很有前途的臨床研究領域，對某些癌症患者具有良好的安全性和初步療效。相信，CAR-NK細胞療法可能會導致腫瘤免疫治療的革命性進展。
來源： 細胞與基因治療領域